1. Hodowle typy
a) pierwszorzedowe - pierwotne - bezposrednio wizolowane z organzimu
b) wtorne
c) linie komorkowe
d) linie niesmiertelne
- telomerazy - koniec DNA, aktywne w komorkach eukariotycznych i nowotworow
- onkogeny - przenoszenie przez wirusy, rak szyjki macicy
- onkowirusy
- nowotworowe
2. Medium - pozywka
a) zdefiniowane
b) niezdefinowane - surowica
c) bezsurowiczne
d) sklad pozywki
- aminokwasy - 9 egzogennych (his, Ile, Leu, Liz, Met, Phe, Thr,, Trp, Val) , dodatkowo Cys, Gln, Tyr
-witaminy
-sole, glukoza
-surowice - zawiera insulina, transferyna
-czerwien fenolowa - wskaznik pH
-dodatki: IL - 2 dla limfocytowa T, erytropoetyna, dla erytrocytow
- antybiotyki - zapobieganie dobrym rokowaniem
zywa komorka - oddycha - CO_2 - zmienia pH
zolta - za duza
fioletowa - dodatkowe antybiotykowe
3. Warunki hodowli:
-temperatury
-tlen , CO_2
-pH
- wilgotnosci
komorka laminarna - zamkniety zamkniety obieg powietrza
cieplonka (m kubata)
dluzszy czas -> zamrozona - 80oC, ciekly azot - 180oC
przylepianie do podloza
4. Hodowle imituja warunki fizjologiczne
- ko-kultury
- hodowle podtrzymywane
- hodowle 3D odpowiednich matrycach
- hodowle uniemozliwiajace adhezyjne
5. Izolacja komorek
-oddzielanie od maciezy miedzykomorkowe i rozbierane pojedyncze komorki
- rozdrobienie mechaniczne tkanki
- trawienie enzymami protelityczne (pepsyna, trypsyna)
-traktorowe EDTA - wiaze jony wapnia potrzebne kontaktu komorka - komorka
Roztre.. komorek
-szok osmotyczny
-ultradzwieki
-przecieranie przez sita
-homonizacja
6. Podzial frakcji
- cytometr przeplywowy z soatetem
-chemotaksja
-adhezja
-wirowanie
* w gradiecie gestosci
** frakcje wedruja w zaleznosci od i ksztaltu rozmanaza sie gdy uzyje sie nieskiego gradientu cukru (5-20%)
** wysoki gradient - w od gestosci (20-70%)
* w gradiencie predkosci
** zalezy od predkosci - (organelle)
-obecnosc markerow - antygenow powierzchniowych
-tworzenie CFU
-cytofluorymetra przeplywowa z sotenem (barwniki immunofluronescesyjne, kapilara, soser, odzielone za pomoca sortera - plytki, naladowanie +/-, po skasowanie)
- rozdzial immunogenetyczne MACs (przeciwciala zokowanie kulkonic magnetyczne) slelekcja pozytywna, selekcja negatywna
- izolacje chemotaksja
7. Liczenie komorek
- cytometr
-komora Burkera
-srednie ze zliczen
-gestosc komorek / cm^3
c=nx10^5
n - zliczonych komorek
8. Okreslenie zywotnosci
-blekit trypanu - martwe niebieskie jadro
-bromek etydyny - martwe jadro - czerwone
-jodek propydyny - martwe jadro czerwone
-dwuoctan flurorescyny - zywe - zielone fluroscyjne cytoplazmy
a) pierwszorzedowe - pierwotne - bezposrednio wizolowane z organzimu
b) wtorne
c) linie komorkowe
d) linie niesmiertelne
- telomerazy - koniec DNA, aktywne w komorkach eukariotycznych i nowotworow
- onkogeny - przenoszenie przez wirusy, rak szyjki macicy
- onkowirusy
- nowotworowe
2. Medium - pozywka
a) zdefiniowane
b) niezdefinowane - surowica
c) bezsurowiczne
d) sklad pozywki
- aminokwasy - 9 egzogennych (his, Ile, Leu, Liz, Met, Phe, Thr,, Trp, Val) , dodatkowo Cys, Gln, Tyr
-witaminy
-sole, glukoza
-surowice - zawiera insulina, transferyna
-czerwien fenolowa - wskaznik pH
-dodatki: IL - 2 dla limfocytowa T, erytropoetyna, dla erytrocytow
- antybiotyki - zapobieganie dobrym rokowaniem
zywa komorka - oddycha - CO_2 - zmienia pH
zolta - za duza
fioletowa - dodatkowe antybiotykowe
3. Warunki hodowli:
-temperatury
-tlen , CO_2
-pH
- wilgotnosci
komorka laminarna - zamkniety zamkniety obieg powietrza
cieplonka (m kubata)
dluzszy czas -> zamrozona - 80oC, ciekly azot - 180oC
przylepianie do podloza
4. Hodowle imituja warunki fizjologiczne
- ko-kultury
- hodowle podtrzymywane
- hodowle 3D odpowiednich matrycach
- hodowle uniemozliwiajace adhezyjne
5. Izolacja komorek
-oddzielanie od maciezy miedzykomorkowe i rozbierane pojedyncze komorki
- rozdrobienie mechaniczne tkanki
- trawienie enzymami protelityczne (pepsyna, trypsyna)
-traktorowe EDTA - wiaze jony wapnia potrzebne kontaktu komorka - komorka
Roztre.. komorek
-szok osmotyczny
-ultradzwieki
-przecieranie przez sita
-homonizacja
6. Podzial frakcji
- cytometr przeplywowy z soatetem
-chemotaksja
-adhezja
-wirowanie
* w gradiecie gestosci
** frakcje wedruja w zaleznosci od i ksztaltu rozmanaza sie gdy uzyje sie nieskiego gradientu cukru (5-20%)
** wysoki gradient - w od gestosci (20-70%)
* w gradiencie predkosci
** zalezy od predkosci - (organelle)
-obecnosc markerow - antygenow powierzchniowych
-tworzenie CFU
-cytofluorymetra przeplywowa z sotenem (barwniki immunofluronescesyjne, kapilara, soser, odzielone za pomoca sortera - plytki, naladowanie +/-, po skasowanie)
- rozdzial immunogenetyczne MACs (przeciwciala zokowanie kulkonic magnetyczne) slelekcja pozytywna, selekcja negatywna
- izolacje chemotaksja
7. Liczenie komorek
- cytometr
-komora Burkera
-srednie ze zliczen
-gestosc komorek / cm^3
c=nx10^5
n - zliczonych komorek
8. Okreslenie zywotnosci
-blekit trypanu - martwe niebieskie jadro
-bromek etydyny - martwe jadro - czerwone
-jodek propydyny - martwe jadro czerwone
-dwuoctan flurorescyny - zywe - zielone fluroscyjne cytoplazmy
Komentarze
Prześlij komentarz